Инфекционные болезни и профилактика внутрибольничных инфекций - Цыркунов Владимир Максимович (читаем книги онлайн без регистрации txt) 📗
3. Биологический – опыты с лабораторными животными.
Серологический: РА, РСК, РГА, РИГА, РТГА, ИФА, РИА, ПЦР, Пауля- Буннеля и др. В основе всех серологических реакций лежит взаимодействие антигена и антитела.
Взятие крови производят натощак (во избежание мутности (хилезности) сыворотки крови) из локтевой вены или уколом из пальца, у грудных детей – из небольшого разреза пятки. При взятии крови необходимо соблюдать правила асептики. Посуда должна быть чистой и сухой, стерилизация необязательна.
Кровь берут в количестве 5–6 мл, затем ставят в термостат на 0,5–1 ч. Затем отделяют сгусток от стенок пробирки и оставляют на 18–20 часов в прохладном месте. Отстоявшуюся сыворотку сливают в другую пробирку (при попадании в пробирку примеси эритроцитов ее центрифугируют). Сыворотка может оставаться на сгустке крови не более 48 часов. Чистую сыворотку можно хранить при температуре 4°С-10°С не более месяца. При необходимости более длительного хранения сыворотку следует заморозить при температуре -20°С – - 70°С, хранить, избегая оттаивания.
Если удалось взять минимальное количество крови (например, у маленьких детей) ее набирают в количестве 0,1 или 0,2 мл и вносят в пробирку с 0,9 мл или 1,8 мл стерильного физиологического раствора (содержащего 0,25% лимоннокислого натрия), что соответствует разведению сыворотки 1:10. Затем взвесь центрифугируют и оставляют в холодном месте до утра. Из отстоявшейся сыворотки делают последующие 2-х кратные разведения (1:20; 1: 40 и т. д.).
Вторым основным компонентом серологических реакций является антиген. Для обнаружения антител в крови ставят реакцию с заведомо известными антигенами. В качестве антигенов применяют взвеси живых или убитых микробов (РА), экстракты или изолированные химические фракции микробов (РГА, РСК. преципитации и др.).
Вирусологический: материалом для вирусологических исследований служит; кал, смывы зева, носа, сыворотка крови и др. Хранить необходимо при низких температурах или в замороженном виде (исключение: цельная кровь – гемолиз эритроцитов). Вирус является облигатным паразитом, поэтому его культивирование представляет определенные сложности. Для культивирования вирусов необходимы культуры клеток. Исходя из этого, подтверждение диагноза при вирусных исследованиях чаще основывается на иммунолюминесцентном методе (свечение в люминесцентном микроскопе комплекса антиген-антитело), серологических методах (ПЦР, РФА, метод парных сывороток и др.), к сожалению, большинство этих методов имеют лишь ретроспективное значение. 4. В последнее время достаточно широко стали использоваться более информативные молекулярно-биологические методы – ПЦР (полимеразная цепная реакция).
Правила забора, хранения и доставки патологического материала для лабораторной диагностики ВБИ.
Структура ответа: Исследование патологического материала, забранного от людей. Исследование объектов окружающей среды. Забор, хранение, доставка патологического материала.
Материал для исследований может забираться как от больных, так и от медперсонала, кроме того исследованию подлежат объекты окружающей среды: воздух, почва, смывы с окружающих предметов, лекарственные формы и т. д.
От людей забирается на исследование: отделяемое дыхательных путей, мокрота, слизь зева, носа, носоглотки; моча, испражнения, желчь, спинномозговая жидкость, кровь, гной (маститы, фурункулы, карбункулы, абсцессы, флегмоны и т. п.), отделяемое язв, свищей; отделяемое женских половых органов и др.
Следует помнить о соблюдении правил техники безопасности при заборе материала для исследовании, поскольку он представляет опасность для здоровья медицинского персонала. Обязательно применение спецодежды и средств индивидуальной защиты, включая защитные очки, смотровые или хирургические перчатки и медицинские респираторы (при риске попадания контаминированных частиц и аэрозолей в дыхательные пути).
1. Исследование крови:
• Кровь для посева следует брать, соблюдая правила асептики.
• Посев необходимо производить во время подъема температуры, в начале появления лихорадки.
• Кровь для посева следует брать до начала специфического антибактериального или химиотерапевтического лечения или, по крайней мере, через 12–24 часа после последнего введения антибактериального препарата больному (в зависимости от скорости выведения примененного препарата из организма). Следует учитывать также стадию заболевания. Кровь для посева следует брать в то время, когда предполагается бактериемия (например, при брюшном тифе в первые 10–15 дней от начала заболевания).
• Для результативного исследования крови необходимо сеять достаточное се количество (не менее 10 мл у взрослых и 5 мл у детей) в большое количество жидких питательных сред. Это делается для того, чтобы путем разведения крови (1:10 1:60) преодолеть естественные бактерицидные свойства крови. Для нейтрализации антибактериальных факторов крови, включая комплимент, рекомендуется, по возможности, применять полианитол-сульфонат натрия 0,025 – 0,ОЗ%.
• Для взятия крови необходимо пользоваться стерильным шприцем.
Нельзя пользоваться шприцем со «стерильного стола» в перевязочной, т.к. на нем могут оказаться бактерии из воздуха, а также нельзя проверять проходимость шприца воздухом.
• Кровь берут у постели больного стерильным шприцем или системой для взятия крови одноразового использования, с соблюдением правил антисептики, и засевают тут же. Осуществляют посев два человека. Один человек обрабатывает кожу больного, пунктирует вену, берет кровь, другой, над пламенем спиртовки, открывает флаконы, подставляет флаконы со средой под струю крови, обжигает горлышки и пробки флаконов, закрывает их.
Кожу над пунктируемой веной обрабатывают 70% спиртом, затем 5% настойкой йода, затем вновь спиртом. При наличии у больного постоянного подключичного катетера или капельницы в вене можно воспользоваться ими. Некоторому количеству крови дают свободно стечь в пробирку (можно использовать для биохимических анализов), затем набирают кровь в шприц для посева. Для полноценного бактериологического исследования нужно получить 12 – 20 мл крови, которую тут же засевают на набор питательных сред. Если возникает подозрение, что в какой-то момент в посев крови могли попасть микроорганизмы из внешней среды (с кожи больного, с рук персонала, из воздуха и т. п.) и нет возможности повторить посев, следует сделать специальную пометку на флаконе, чтобы соответственно оценить результаты посевов.
2. Забор испражнений для исследования.
Забор испражнений лучше всего производить сразу после дефекации, до начала антибактериального лечения. Сбор фекалий осуществляют из судна, горшка, пеленки, специальных лотков или другой посуды, тщательно дезинфицированной осветленным раствором хлорной извести и многократно отмытой горячей водой для полного удаления следов дезинфектанта. При наличии патологических примесей (гной, слизь, хлопья) их обязательно включают в отбираемую пробу. При невозможности получения испражнений после дефекации материал собирают непосредственно из прямой кишки с помощью ректальных ватных или ватно-марлевых тампонов (укрепленных на деревянной палочке или проволочной петле). Ректальный тампон вводят в прямую кишку на 8–10 см. При обследовании на носительство сальмонелл целесообразно брать испражнения после дефекации, вызванной приемом солевого слабительного, обладающего и желчегонным действием. Испражнения собирают указанным выше способом из суден, горшков или ректальным тампоном, но после дефекации.
Желательно посев испражнений осуществлять непосредственно после дефекации или в пределах 2-х часового периода; если это невозможно необходимо законсервировать материал, Консервирование исследуемого материала может быть обеспечено воздействием физических (сохранение при t 2 – 6°С или высушиванием) и химических факторов. Наиболее широко в качестве химического консерванта (транспортного раствора) используют глицериновую смесь (нейтральный химически чистый глицерин и физиологический раствор). Можно использовать в качестве консервирующей транспортной среды буферный раствор фосфатов (рН 8,0), особенно рекомендуемый при исследовании на иерсинии. Соотношение испражнений и среды не должно превышать 1:5.
